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常用的細胞培養(yǎng)基有哪些 細胞培養(yǎng)基的品質要求

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摘要:培養(yǎng)基除了培養(yǎng)微生物外,細胞也是可以用培養(yǎng)基培養(yǎng)的,常用的細胞培養(yǎng)基主要有MEM培養(yǎng)基、DMEM培養(yǎng)基、IMDM培養(yǎng)基、Ham 's F-12K培養(yǎng)基、DMEM/F12培養(yǎng)基、McCoy’s 5A培養(yǎng)基、RPMI-1640培養(yǎng)基、L15培養(yǎng)基等多種,不管是哪種細胞培養(yǎng)基,一般在品質方面需要滿足外觀、溶解性、pH值、水分、冰點滲透壓等方面的要求。下面一起來了解一下常用的細胞培養(yǎng)基有哪些以及細胞培養(yǎng)基的品質要求吧。

一、什么是細胞培養(yǎng)基

細胞培養(yǎng)基是培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基,既是供給細胞營養(yǎng)和促使細胞生殖增殖的基礎物質,也是培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境,一般是鹽、碳水化合物、維生素、氨基酸、代謝前體、生長因子、激素和微量元素的復雜混合物。

二、常用的細胞培養(yǎng)基有哪些

細胞培養(yǎng)基的種類眾多,由于不同細胞系對這些成分的要求各不相同,因此產(chǎn)生了不同類型的培養(yǎng)基,常用的細胞培養(yǎng)基主要有:

1、MEM培養(yǎng)基

是一種添加了營養(yǎng)物的最低必需培養(yǎng)基,僅含有12種必需氨基酸、L-谷氨酰胺和8種維生素,含糖量為1g/L。MEM是一種最基礎、最常用的細胞培養(yǎng)基,主要應用于貼壁細胞的培養(yǎng),在添加血清后,可用于培養(yǎng)多種單層生長的細胞,如成纖維細胞。修改配方后的a-MEM則可廣泛應用于各種哺乳動物懸浮和貼壁細胞培養(yǎng)。

2、DMEM培養(yǎng)基

氨基酸含量是MEM的兩倍,維生素含量是MEM的4倍,以及硝酸鐵、丙酮酸鈉和一些補充氨基酸。此外,DMEM分為低糖型和高糖型,葡萄糖含量分別為1g/L和4.5g/L。(低糖適于依賴性貼壁細胞培養(yǎng),特別適用于生長速度快、附著性較差的腫瘤細胞培養(yǎng);高糖更適合高密度懸浮細胞培養(yǎng),也適用于附著性較差,但又不希望它脫離原來生長點的克隆培養(yǎng),也可用于雜交瘤中骨髓瘤細胞和DNA轉染的轉化細胞的培養(yǎng)。)

3、IMDM培養(yǎng)基

用于淋巴細胞和雜交瘤細胞的生長。與DMEM相比,添加了HEPES和硒,硝酸鉀取代了硝酸鐵,并且含有更多的氨基酸、維生素和無機鹽。

4、Ham 's F-12K培養(yǎng)基

用于支持原代細胞的生長和分化。F-12K增加了氨基酸、丙酮酸、生物素、鈣、鎂、腐胺和酚紅的含量。

5、DMEM/F12培養(yǎng)基

DMEM和F12的1:1混合物,能夠在低血清條件下支持多種哺乳動物細胞的培養(yǎng),在此培養(yǎng)基中成功培養(yǎng)的細胞包括:MDCK、神經(jīng)膠質細胞、成纖維細胞和人內皮細胞等。

6、McCoy’s 5A培養(yǎng)基

廣泛用于多種原代細胞及細胞系的培養(yǎng),如來源于骨髓、皮膚、脾臟、腎臟和肺等組織的哺乳動物原代細胞。

7、RPMI-1640培養(yǎng)基

是在McCoy’5A的基礎上進行改良研發(fā)出的,最初用于人白血病細胞的懸浮培養(yǎng),后來發(fā)現(xiàn)也適用于HeLa、MCF-7、PC12、外周血單核細胞(B/T淋巴細胞)和星形細胞的培養(yǎng)。RPMI 1640與其它培養(yǎng)基的區(qū)別是含有還原型谷胱甘肽和高濃度維生素。此外還含有含有MEM、DMEM中不含的生物素、維生素B12和對氨基苯。

8、L15培養(yǎng)基

L-15培養(yǎng)基的配方中不含用于CO2平衡環(huán)境的碳酸鹽緩沖系統(tǒng), 而是用磷酸鹽、L-精氨酸、L-組氨酸和 L-半胱氨酸作為緩沖劑。用半乳糖和丙酮酸鈉代替葡萄糖以防止乳酸的形成。可以在無CO2培養(yǎng)箱中進行細胞培養(yǎng),或者擰緊瓶蓋培養(yǎng)。

三、細胞培養(yǎng)基的品質要求

細胞培養(yǎng)基有多種,不同種類的細胞培養(yǎng)基用于培養(yǎng)不同細胞,一般來說,好的細胞培養(yǎng)基,需要滿足以下幾點要求:

1、外觀

顏色、粉末細度須均勻。

2、溶解性

培養(yǎng)基完全溶解,可以避免培養(yǎng)基內營養(yǎng)成分的流失。

3、pH值

哺乳類動物細胞生長需要合適的酸堿度,同時pH值的測定也可以檢查培養(yǎng)基的批間差異。

4、水分

培養(yǎng)基的營養(yǎng)成份很豐富,利于微生物的滋長,因此水分的含量控制可以延長有效期。

5、冰點滲透壓

細胞必須生活在合適的滲透壓環(huán)境中,同時滲透壓值的測定也可以檢查培養(yǎng)基的批間差異。

6、菌落總數(shù)

粉末培養(yǎng)基不是無菌制劑,培養(yǎng)基本身的營養(yǎng)成分很豐富,容易滋生微生物,因此菌落的控制可以延長有效期

7、細胞生長試驗

可檢查細胞培養(yǎng)基是否有促生長的能力,以及是否有不利細胞生長的毒素。

8、細菌內毒素

為滿足生物制品細菌內毒素的控制要求,作為生物制品生產(chǎn)原料的培養(yǎng)基同樣需要細菌內毒素控制。

9、穩(wěn)定性

確定產(chǎn)品的儲存、運輸條件,產(chǎn)品的保質期限。

10、一致性

驗證產(chǎn)品的均一性。

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